Uklanjanje stanica iz staklene posude za kulturu ključni je korak u mnogim biološkim i medicinskim istraživačkim procesima. Kao dobavljač visokokvalitetnog staklenog posuđa za kulturu, uključujućiČetvrtasta staklena Petrijeva zdjelica,Velika staklena Petrijeva zdjelica, iPetrijeva posuda sa staklenim dnom, razumijem važnost ovog postupka i potrebu za dobro izvedenim pristupom.
Razumijevanje osnova stanične adhezije
Stanice u staklenoj posudi za kulturu prianjaju na površinu različitim mehanizmima. Oni koriste proteine kao što su integrini za pričvršćivanje na izvanstanični matriks ili na samu površinu stakla. Ovo prianjanje bitno je za rast, preživljavanje i funkcioniranje stanica. Međutim, kada dođe vrijeme za prikupljanje stanica za daljnju analizu, moramo prekinuti ove ljepljive veze bez oštećenja stanica.
Priprema za uklanjanje stanica
Prije početka procesa uklanjanja stanica, važno je osigurati sterilno okruženje. To znači rad u laminarnoj haubi i nošenje odgovarajuće osobne zaštitne opreme, poput rukavica i laboratorijske kute. Svi reagensi i oprema moraju biti sterilizirani.
Također moramo odabrati prave reagense za odvajanje stanica. Najčešće korišteni reagensi su enzimi poput tripsina. Tripsin je proteolitički enzim koji može razgraditi proteine odgovorne za prianjanje na staničnu površinu. Drugi neenzimski reagensi, kao što je EDTA (etilendiamintetraoctena kiselina), također se mogu koristiti. EDTA kelira ione kalcija koji su neophodni za adheziju stanica-stanica i stanica-matriks.
Korak po korak postupak uklanjanja stanica
Korak 1: Aspirirajte medij kulture
Najprije sterilnom pipetom pažljivo usisajte medij kulture iz staklene posude za kulturu. Ovaj korak uklanja sve ostatke i neadhezivne stanice. Budite nježni kako ne biste ometali prianjajuće stanice.
Korak 2: Operite ćelije
Nakon aspiracije medija, dodajte mali volumen fosfatno puferirane fiziološke otopine (PBS) u posudu. PBS je uravnotežena otopina soli koja pomaže u održavanju fizioloških stanja stanica. Lagano ljuljajte posudu naprijed-natrag kako biste isprali ćelije. Zatim aspirirajte PBS. Ovaj korak pranja pomaže u uklanjanju svih preostalih komponenti medija i slabo pričvršćenih stanica.
Korak 3: Dodajte reagens za odvajanje
Zatim dodajte odgovarajući reagens za odvajanje u posudu. Ako koristite tripsin, koncentracija i vrijeme inkubacije su kritični. Uobičajena koncentracija tripsina je 0,25%, a vrijeme inkubacije obično je oko 2 - 5 minuta na 37°C. Međutim, to može varirati ovisno o vrsti stanice. Na primjer, neke su stanice osjetljivije na tripsin i mogu zahtijevati nižu koncentraciju ili kraće vrijeme inkubacije.
Prilikom dodavanja tripsina pazite da ravnomjerno prekrijete cijelu površinu posude. Stavite posudu natrag u inkubator kako bi tripsin djelovao.
Korak 4: Pratite Odvajanje
Tijekom inkubacije povremeno provjerite stanice pod mikroskopom. Primijetit ćete da se stanice počinju zaokruživati kako tripsin razgrađuje adhezijske proteine. Nakon što se većina stanica odvoji, što se može vidjeti kao plutajuće stanice u otopini, vrijeme je da se zaustavi aktivnost tripsina.
Korak 5: Neutralizirajte tripsin
Kako biste zaustavili aktivnost tripsina, dodajte jednaku količinu medija kulture koji sadrži serum. Serum sadrži inhibitore proteaze koji mogu inaktivirati tripsin. Lagano pipetirajte medij gore-dolje kako biste ga pomiješali s otopinom tripsina.
Korak 6: Sakupite stanice
Upotrijebite pipetu za prijenos stanične suspenzije iz staklene posude za kulturu u epruvetu centrifuge. Centrifugirajte epruvetu pri odgovarajućoj brzini (obično oko 1000 - 1500 okretaja u minuti tijekom 5 - 10 minuta) da se stanice talože. Nakon centrifugiranja, pažljivo aspirirajte supernatant, ostavljajući stanični talog na dnu epruvete.
Alternativne metode za uklanjanje stanica
U nekim slučajevima mogu se dati prednost neenzimskim metodama. Na primjer, mehaničke metode mogu se koristiti za struganje stanica sa staklene površine. To se može učiniti pomoću strugala za ćelije. Međutim, mehaničko struganje može biti više štetno za stanice u usporedbi s enzimskim metodama.
Još jedna neenzimska opcija je korištenje medija s niskim sadržajem kalcija. Smanjenjem koncentracije kalcija u mediju može se oslabiti adhezija stanica - stanica i stanica - matriks, omogućujući stanicama lakše odvajanje.
Rješavanje problema
Ponekad proces uklanjanja stanica možda neće ići glatko kako se očekuje. Ako se stanice ne odvajaju pravilno, to može biti zbog nekoliko razloga. Koncentracija tripsina može biti preniska ili je vrijeme inkubacije možda prekratko. U tom slučaju možete pokušati lagano povećati koncentraciju tripsina ili produžiti vrijeme inkubacije.
S druge strane, ako su stanice oštećene tijekom procesa uklanjanja, to može biti zato što je koncentracija tripsina previsoka ili je vrijeme inkubacije predugo. U takvim situacijama treba smanjiti koncentraciju tripsina i skratiti vrijeme inkubacije.
Kvaliteta staklenih posuda za kulture i uklanjanje stanica
Kvaliteta staklene posude za kulturu također može utjecati na proces uklanjanja stanica. Naše staklene posude za kulturu izrađene su od visokokvalitetnog stakla koje daje glatku i čistu površinu za rast stanica. Površinska obrada našeg posuđa osigurava pravilno prianjanje stanica tijekom faze rasta i lako odvajanje kada je potrebno.
Na primjer,Četvrtasta staklena Petrijeva zdjelicanudi veću površinu u usporedbi s tradicionalnim okruglim posudama, što može biti korisno za uzgoj većeg broja stanica. TheVelika staklena Petrijeva zdjelicaidealan je za eksperimente koji zahtijevaju veliki volumen ćelija. iPetrijeva posuda sa staklenim dnomsavršen je za primjene slika, gdje je jasna vizualizacija stanica ključna.
Zaključak
Uklanjanje stanica iz staklene posude za kulturu je delikatan, ali bitan proces u biološkim istraživanjima. Slijedeći odgovarajuće korake i koristeći prave reagense, možemo osigurati uspješnu žetvu zdravih stanica. Kao dobavljač staklenih posuda za kulturu, predani smo pružanju visokokvalitetnih proizvoda koji podržavaju vaše istraživačke potrebe. Ako ste zainteresirani za kupnju naših staklenih posuda za svoje eksperimente, pozivamo vas da nas kontaktirate za više informacija i kako bismo razgovarali o vašim specifičnim zahtjevima.
Reference
- Freshney, RI (2010). Kultura životinjskih stanica: priručnik za osnovnu tehniku i specijaliziranu primjenu. Wiley - Liss.
- Sambrook, J. i Russell, DW (2001). Molekularno kloniranje: Laboratorijski priručnik. Cold Spring Harbor Laboratory Press.